Brucelóza je chronické onemocnění zvířat a lidí způsobené bakteriemi souhrnně známými jako Brucella. Podle klasifikace (2015) Společného výboru odborníků FAO/WHO pro brucelózu se rod Brucella skládá z 11 druhů, které jsou rozděleny do řady biovarů: Brucella melitensis (maltština), Brucella abortus (Brucella bovis, skot), Brucella suis (prase) a Brucella canis (psí). Brucelóza různých typů se vyskytuje na všech kontinentech včetně Antarktidy. Na brucelózu je náchylných 60 druhů obratlovců, 30 druhů klíšťat sajících krev, dvě blechy, dva druhy komárů, ale i mouchy domácí, plazi, obojživelníci, delfíni, velryby, mořské vydry a ryby. V období od roku 2008 do první poloviny roku 2020 bylo v Rusku registrováno 4854 115 nepříznivých bodů s nemocí skotu, ve kterých bylo identifikováno 980 527 kusů nemocných zvířat, a 19 nepříznivých bodů pro brucelózu malých přežvýkavců (MRS), ve kterých bylo 866 XNUMX nemocných. byly registrovány ovce a kozy . Důležitým článkem při eliminaci brucelózy zvířat je včasná diagnostika. Diagnóza brucelózy je stanovena na základě výsledků bakteriologických, sérologických, molekulárně genetických a alergických studií, přičemž se berou v úvahu epizootické údaje, jakož i klinické a patologické příznaky onemocnění. Nejinformativnější metodou pro intravitální diagnostiku brucelózy je metoda sérologická, založená na imunologických reakcích, které jsou založeny na specifických vztazích mezi protilátkou a antigenem. Týden po rozvoji onemocnění se v krvi objevují imunoglobuliny třídy M (IgM), jejichž koncentrace dosahuje maximální hodnoty během prvních týdnů a poté postupně klesá (akutní fáze onemocnění) a ve 2. -3 týdny se tvoří sérové IgG a o něco později – IgA . Chronická brucelóza je charakterizována absencí specifických IgM, v krvi je možná cirkulace IgA a IgG nebo jednoho z nich. V současné době se v Ruské federaci používá 14 diagnostických (sérologických) testů na brucelózu (RA, RSK, RNGA, RID s antigenem O-PS, RBP, ČR s mlékem, ELISA aj.). Praktici se často ptají, proč existuje tolik sérologických reakcí a je možné získat maximálně spolehlivý výsledek s menším počtem reakcí? Vzhledem k tomu, že brucelóza se vyskytuje jedinečným způsobem téměř u každého jednotlivého zvířete v závislosti na věku, pohlaví, březosti, fyziologickém stavu, virulenci patogenu atd., ve stejném nepříznivém stádě, kdy dojde k infekci, jsou jedinci pozorováni , ostře se liší v čase a napětí produkce protilátek. Indikace ke stejné reakci se proto výrazně liší v závislosti na délce trvání onemocnění a stupni jeho patologického projevu. Nedávno infikovaná zvířata tedy reagují na RA ve vyšším procentu než ta, která jsou dlouhodobě nemocná. Vyčerpaná zvířata nemusí reagovat nebo reagovat velmi slabě ve všech reakcích. Proto je obecně přijímáno, že když se provedou dvě, tři, čtyři nebo více sérologických reakcí, identifikuje se více nemocných zvířat než při kterékoli jedné reakci. Rose provedla test (RBP) Oproti jiným metodám sérologické diagnostiky brucelózy má RBP tyto výhody: vysokou citlivost, schopnost detekovat specifické protilátky proti brucelóze (široké spektrum tříd a podtříd IgM, IgG, IgA) v krátké době po infekci a díky na kyselou reakci antigenu, inhibují projevy nespecifických protilátek, stejně jako stabilitu odečtů, technickou jednoduchost nastavení, vyžadující malou práci a čas, jasnost a rychlost získaných výsledků. Metoda: Podstatou metody je identifikace specifických protilátek v krevním séru zvířat na základě schopnosti sérových protilátek aglutinovat brucelózní antigen, což má za následek vytvoření výrazné aglutinace obarveného brucelového antigenu ve formě velkých nebo malých růžových vloček . RBP se používá jako expresní metoda pro diagnostiku brucelózy u skotu, jaků, buvolů, zebu, koz, ovcí, koní, velbloudů, sobů (jelenů), prasat a psů, kteří nejsou imunizováni vakcínami proti brucelóze. Před provedením reakce se antigen a testovací séra uchovávají 30-40 minut při pokojové teplotě. Antigen se důkladně protřepe. Reakce se provádí na čistých smaltovaných deskách nebo dlaždicích s otvory při teplotě ne nižší než 18 °C. Testované krevní sérum v dávce 0,03 ml se přidá na dno jamky injekční stříkačkou – poloautomatickou nebo mikropipetou. Při studiu krevního séra skotu, koní, velbloudů se do každé jamky vedle séra pomocí antigenové pipety nebo mikropipety přidá 0,03 ml (2 kapky) antigenu, při studiu krevního séra ovcí, koz, sobů (jelenů) prasata, psi – 0,015 ml (1 kapka) antigenu. Poté se antigen v každé jamce důkladně promíchá se sérem pomocí aktivních pohybů ručního mixéru, dokud se nezíská homogenní kapalina, která se rozdělí po celém povrchu jamky. Destička se sérem a antigenem se protřepe jemnými rotačními pohyby nebo pomocí k tomu určeného přístroje. Reakce se měří pouhým okem do 4 minut po smíchání séra s antigenem s mírně nakloněnou destičkou. Pokud je reakce pozitivní, objeví se do 4 minut malé nebo velké vločky růžového aglutinátu. Aglutinace, ke které dojde po 4 minutách, se nebere v úvahu. Na začátku práce je testován antigen negativními a pozitivními séry na brucelózu v těchto dávkách a také antigen pro spontánní aglutinaci (0,03 ml antigenu se přidá do 0,03 ml fyziologického roztoku). Výsledek: Reakce je považována za negativní, pokud nedochází k aglutinaci (směs je homogenní a rovnoměrně zbarvená). V chovech bez brucelózy se v RA RSK (RDSC) nebo RA I RID vyšetřuje veškeré krevní sérum zvířat, u kterých byl získán pozitivní RBP, ten samý nebo následující den. Při pozitivních, negativních nebo pochybných výsledcích v RA a RSK (RDSC) nebo RA a RID jsou posuzovány v souladu s platnými hygienickými a veterinárními předpisy. Kruhová reakce (RR) s mlékem KR s mlékem byla vysoce ceněna jak u nás, tak v zahraničí. Všichni výzkumníci zaznamenávají výraznou citlivost, dostupnost a rychlost metody. Pomocí této reakce se minimálně 3-4x ročně vyšetřují mléčné farmy a tržní mléko, přičemž vzorky mléka jsou odebírány přímo kravám při dojení z konzerv libovolné velikosti. Metoda: Podstatou reakce je průkaz specifických protilátek antigenem v mléce krav nemocných brucelózou nebo imunizovaných aglutinogenními vakcínami proti brucelóze. Pozitivní reakce je indikována vytvořením modrého kroužku v horní vrstvě krému. Expertní výbor FAO/WHO pro brucelózu (šestá zpráva, 1986) se domnívá, že v mléce, stejně jako v krevním séru skotu, jsou izotypy IgG přítomny v různých kombinacích.1, IgG2 a IgA. Navíc IgA, což je sekreční imunoglobulin, se nachází v mnohem větším množství v mléce než v krevním séru, a proto hraje hlavní roli v kruhové reakci. Způsob podávání CR s mlékem je vcelku jednoduchý. Přidejte 2 cm 3 mléka do zkumavek (nejlépe Florinsky) pomocí pipety nebo dávkovače. Antigen se přidá 0,1 cm 3 do každé zkumavky se vzorkem mléka. Při zkoumání každé šarže mléka se používají kontrolní vzorky: – mléko od zdravé krávy (buvolí); – směs mléka od zdravé krávy (buvola) se sérem na brucelózu (0,1 cm 3 syrovátky na cm 3 mléka). Po přidání antigenu se zkumavky protřepou a udržují ve vodní lázni při teplotě 37-38 °C po dobu 1 hodiny nebo v termostatu po dobu 2 hodin. Výsledek: Výsledky reakce jsou vizuálně zohledněny 30-40 minut po vyjmutí stojanů z vodní lázně (termostat) a hodnoceny v křížcích podle následujícího schématu: – (+++) tři křížky – jasně definovaný modrý kroužek v horní části část mléčného sloupce ve vrstvě smetany, zbytek mléka zůstává bílý; – (++) dva křížky – jasně definovaný modrý kroužek v horní části sloupce mléka ve vrstvě smetany, zbytek mléka má namodralou barvu; – (+) jeden křížek – modrý kroužek ve vrstvě smetany je slabě vyjádřen a celý sloupec mléka je modrý; — (-) minus — sloupec mléka zůstává jednotně zbarven v původní modré barvě, která byla získána ihned po smíchání s antigenem, a vrstva smetany je bílá nebo mírně nažloutlá. Všechny vzorky mléka se skóre (+++) tři křížení a (++) dvě křížení jsou považovány za pozitivní, (+) jedno křížení – pochybné. Pokud jsou v celém stádě získány negativní výsledky CR, je považováno za prosté brucelózy. Krevní sérum zvířat stáda, ve kterém byli identifikováni jedinci, kteří pochybně nebo pozitivně reagují v ČR na mléko, je testováno na brucelózu v RBP nebo v RA a RSK (RDSC), nebo v RA a RID, nebo v RNGA nebo v ELISA. Současně se provádí klinické vyšetření zvířat a je vyloučeno jejich onemocnění mastitidou. Při pozitivních výsledcích testů krevních sér na brucelózu se se zvířaty ve stádě zachází v souladu s platnými hygienickými a veterinárními předpisy. Závěr Dvě sérologické reakce: test bengálské růže (RBT) a kruhová reakce (CR) s mlékem jsou tedy intravitální předběžné expresní diagnostické testy na brucelózu u zvířat ve zdravých stádech. Tyto sérologické testy se snadno používají a lze je provádět v terénu. Testovací systémy pro diagnostiku brucelózy zvířat v testu bengálské růže (RBS) a kruhové reakci (RR) s mlékem vyrábí Shchelkovo Biocombine FKP a jejich kvalita splňuje všechny mezinárodní požadavky.
Nikolaj Ivanovič Zenov, doktor historických věd, poradce ředitele pro výrobu Shchelkovského biokombinátu FKP, Marina Sergeevna Chumakova, veterinární lékařka, specialistka na propagaci biologických produktů FKP “Shchelkovo Bioplant”
Copyright 2023 FKP “Shchelkovo Bioplant”
